一、实验目的

本实验旨在指导学生提取并鉴定DNA脑细胞会不会再生，从而掌握DNA提取的基本原理和方法。通过实验操作，学生可以亲身体验DNA提取的过程，加深对DNA结构和性质的理解，为后续分子生物学实验奠定基础。

二、实验原理

DNA粗提取利用细胞裂解剂破坏细胞膜和细胞核膜，释放出DNA分子。随后，通过离心分离，沉淀出含DNA的沉淀。CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)具有阳离子特性，可以与DNA分子骨架中的负电荷相互作用，形成不溶于水的复合物。氯化钠溶液的加入可以中和CTAB和DNA之间的结合，使DNA复合物沉淀出来。

三、实验材料 1. 生物材料 新鲜菠菜叶或香蕉果肉 去离子水 2. 提取溶液 细胞裂解缓冲液：Tris-EDTA缓冲液中加入SDS（十二烷基硫酸钠） CTAB溶液：CTAB溶液中加入氯化钠溶液 3. 其他材料 离心机 离心管 枪头 吸管 玻璃棒 70%乙醇 四、实验步骤 1. 生物材料的准备

将菠菜叶或香蕉果肉切碎，加入适当体积的去离子水，研磨成匀浆。

2. 细胞裂解

将研磨好的匀浆转移至离心管中，加入细胞裂解缓冲液，彻底混匀。将离心管放置于冰浴中30分钟，定期混匀。

3. 离心分离

将离心管在4℃条件下脑细胞会不会再生，12000转/分钟离心10分钟。吸取上清液至新离心管中。

4. DNA沉淀

向离心管中加入等体积的CTAB溶液，彻底混匀。将离心管放置于室温下15分钟，定期混匀。

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5. 离心分离

将离心管在4℃条件下，12000转/分钟离心10分钟。吸取上清液至废液瓶中。

6. DNA清洗

向沉淀中小心加入70%乙醇，用玻璃棒轻轻洗涤沉淀。弃去乙醇溶液，重复上述步骤一次。

7. DNA溶解

向沉淀中加入适当体积的TE缓冲液（Tris-EDTA缓冲液），用玻璃棒轻轻混匀，直至DNA完全溶解。

五、DNA鉴定 1. 紫外分光光度法

取适量DNA溶液，在紫外分光光度计上测量其在260nm和280nm处的吸光度值。DNA溶液的纯度可以通过其A₂₆₀/A₂₈₀值来判断。

2. 电泳法

将DNA溶液与适当体积的装样缓冲液混合，然后上样至琼脂糖凝胶中。进行电泳，将DNA片段根据其长度分离。通过凝胶染料染色，可以观察到DNA片段的条带，并根据条带位置判断其大小。

六、注意事项

实验过程中，应始终保持无菌操作，以避免污染。

细胞裂解过程应在冰浴中进行，以防止DNA降解。

CTAB溶液具有毒性，使用时应注意安全。

70%乙醇具有易燃性，使用时应远离火源。

紫外分光光度计时，应使用空白对照样进行校正。

电泳过程中，电泳槽中应保持恒定电压，以避免电泳条件的不一致。

七、实验结果与讨论 1. 紫外分光光度法

通过紫外分光光度法测得的DNA溶液A₂₆₀/A₂₈₀值，可以判断DNA溶液的纯度。纯度较高的DNA溶液，其A₂₆₀/A₂₈₀值接近1.8。如果A₂₆₀/A₂₈₀值偏高（>2.0），则说明DNA溶液中含有杂质，如蛋白质或RNA。如果A₂₆₀/A₂₈₀值偏低（<1.6），则说明DNA溶液中含有降解产物。

2. 电泳法

通过电泳法分离的DNA片段条带，可以判断DNA片段的长度。根据凝胶染料染色结果，可以观察到不同大小的DNA片段。DNA片段的长度可以通过与标准DNA片段进行比较来确定。

八、实验

通过DNA粗提取与鉴定实验，学生可以掌握DNA提取和鉴定的一般原理和方法。通过实验操作脑细胞会不会再生，学生可以亲身体验DNA提取的过程，并通过紫外分光光度法和电泳法对提取的DNA进行鉴定。本实验为后续分子生物学实验奠定了基础，有助于学生理解DNA结构、性质和应用。